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DNA 재조합의 설계와 복제
Construction and Cloning of a DNA Recombinant
클로닝은 유전자 발현의 향상과 유전자의 구조와 기능 연구에 많이 사용됩니다. 이 실험에서는 카나마이신 내성 유전자와 pUC 벡터를 공유하듯이 연결하여 재조합 플라스미드를 만든 후 겔 전기 영동으로 ligation을 확인합니다. 새로운 kan 플라스미드를 포함하는 외인성 DNA를 흡수하기위해 competent E.coli 세포 균주를 준비합니다. 카나마이신 플레이트 상에서 세포를 배양하고 형질 전환된 박테리아를 선택합니다. 생존한 콜로니는 이후 카나마이신 성장 배지에서 밤새 배양됩니다. 마지막으로 박테리아 배양에서 kan 삽입의 존재를 확인합니다. 플라스미드 분리, 여러 제한효소조합으로 절단, 겔 전기영동을 통한 조각 분석으로 삽입 방향을 결정합니다.
학교장터(S2B)번호 : 202006290887096    바로가기 
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실험 가능 횟수 및 인원

  • 5조
실험소요시간

  • 5시간 + 12~18시간 배양 (E.coli source plate 미리 준비시)
필요장비

  • 전기영동장치, 파워서플라이, 피펫, 피펫팁, 전자저울, 전자렌지(핫플레이트), 250mL 삼각플라스크, 안전장갑, 증류수, TruBlu™ 2 Transilluminator, 염색용 트레이, 얼음, 줄자
구성

  • Instructions, BactoBeads™, enzymes, plasmid DNA, restriction enzyme dilution buffer, enzyme grade water, standard DNA fragments, restriction enzyme reaction buffer, gel loading solution, agarose powder, electrophoresis buffer, stains, calibrated pipet
보관

  • 일부 구성품 냉장과 냉동보관 필요