판매가 | LMO시설등록 후 구입 |
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제조사 | Edvotek |
적립금 | 2,510원 |
상품코드 | ED223-AP08 |
배송비 | 무료 |
원산지 | 해외 |
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상품 정보 | 가격 | 삭제 |
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총상품금액(수량) 0 |
920,000원
90,000원
상품명 | 형질전환 실험세트2 (GFP를 이용한 E.coli의 형질전환) |
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판매가 | LMO시설등록 후 구입 |
제조사 | Edvotek |
적립금 | 2,510원 |
상품코드 | ED223-AP08 |
배송비 | 무료 |
원산지 | 해외 |
수량 |
문제점 |
원인 |
해결 |
소스 플레이트에서 세포 성장부족 |
배양시간이 너무 짧음 |
37℃에서 총 16-20시간 배양 |
항생제가 소스 플레이트에 들어감 |
플레이트에 부을 때 정확한 단계에서 항생제와 시약들을 넣었는지 확인 | |
부정확한 배양 온도 |
설정된 배양기 온도를 별도의 온도센서로 측정 | |
Satelite Colony가 형질전환 플레이트에 형성됨 |
부정확한 농도의 항생제 |
정확한 농도인지 확인 |
저하된 항생제 |
ReadyPour agar 가열 후 60℃까지 충분히 식히고 추가 | |
플레이트를 너무 많은시간 배양 |
37℃에서 16-18시간 배양 | |
플레이트의 콜로니가 지저분해 보임 |
형질전환체를 가진 플레이트를 너무 빨리 뒤집음 |
플레이트를 뒤집기 전 cell suspension이 충분히 흡수되게 함 |
플레이트에 물기가 너무 많음 |
실온에서 건조 | |
플레이트에 콜로니가 나타나지 않음 |
플라스미드DNA가 형질전환 과정에서 추가되지 않음 |
형질전환 튜브에 추가시 정확한 피펫사용이었는지 확인 |
부정확한 host cell |
정확한 박테리아 균주가 사용되었는지 확인 | |
적절하지 못한 heat shock |
42℃에서 heat shock이 정확히 90초동안 진행되었는지 확인 | |
항생제 농도 부정확 |
정확한 항생제 사용 | |
낮은 형질전환 효율 |
충분하지 못한 세포 |
소스플레이트에서 더 많은 콜로니 선택(500ulCaCl2당 15개@1-2mm) |
20시간 넘게 소스플레이트를 배양 |
20시간을 넘기지않도록 주의. 필요한 경우는 20시간 후에 냉장. 냉장여부에 상관없이 20시간 이상 배양된 소스플레이트는 사용하지 않도록함 | |
플레이트가 너무 오래됨 |
형질전환 플레이트 준비 후 빠르게 사용 | |
CaCl2에 세포가 resuspend 잘 안됨 |
볼텍싱으로 CaCl2에서 세포를 완전히 resuspend | |
CaCl2 용액이 충분히 차갑지 않음 |
첨가하기 전에 미리 충분히 얼음에서 10-15분간 배양, 30분이상은 하지말 것. 더많은 DNA가 박테리아 세포 외벽에 붙도록 하기위함 | |
플라스미드 DNA가 너무 많거나 너무 적게 cell suspension |
플라스미드의 정확한 양을 사용 | |
적절하지 못한 heat shock |
42℃에서 heat shock이 정확히 90초동안 진행되었는지 확인 | |
저하된 항생제 |
ReadyPour agar 가열 후 60℃까지 충분히 식히고 추가 | |
부정확한 농도의 항생제 |
정확한 농도인지 확인 |